茶叶籽油的脂肪伴随物成分分析初报

从茶叶籽中提取的油脂为茶叶籽油。茶叶籽是山茶科山茶属植物茶树，的种子，早在我闰明代医药学家李时珍（1518-1593）所着的《本草纲目》中就有记载茶叶籽可以搾油，卫生部2009年第18号公告中正式批准茶叶籽油为新资源食品。 2009年全国茶园总面积为184.9万公顷，从1965年起即为世界上茶园而积最大的国家^ 一般每公顷可产茶叶籽3000公斤左右|41。长期以来人们习惯将茶叶籽油和油茶籽油统称为茶籽油，事实上这两种油存在较大区别。

目前国内对茶叶籽油的开发利用逐渐兴起， 茶叶籽油中的脂肪伴随物大部分为其功能活性成分，也是说明其自身营养优势的依据，对此国内外还未见相关详细报道。探明茶叶籽油中的脂肪伴随物成分对于茶叶籽油的开发具有重要意义。为此，本文对茶叶籽油的理化性质和主要脂肪伴随物成分进行了测定分析，为今后研究制订茶叶籽汕品质指标和开发茶叶籽油新茶品提供依据。

1材料与方法 ，

1.1材料与仪器1.1.1茶叶籽油样品

1号样品由实验室采用六号溶剂在常温下超声波浸提自制，原料为上一年产的茶叶籽，产地福建福安；2号样品由浙江茗阳茶叶生物科技有限公司提供，2011年1月生产；3号样品由新昌县益生茶业科技有限公司生产提供，茶叶籽原料与1 号样同，未添加额外抗氧化剂，2011年6月生产。以上油样1号为浸出毛油，未精炼；2、3号均为工厂生产的市售精制油。
1.1.2试剂

α胆甾垸醇，美国sigma公司；BSTFA+TMCS（99:1） 试剂，美国supelco公司；生育酚混合标准品（含有α、β、γ、δ四种），美国Roche^公司；氢氧化钾、酚酖、无水乙醚、石油醚、无水乙醇、正己垸、甲醇、三氟化硼、三氯甲烷、冰乙酸、碘化钾、硫代硫酸钠、异辛烷、可溶性淀粉、酒石酸钾钠等均购自国药试剂公司。
1.1.3仪器

FOSS-SCINO ST 310索氏浸提系统，FOSS公司；申科旋转蒸发仪，SHB-3循环水真空泵，上海申生科技有限公司，AR2140电子分析天平，梅特勒-托利多仪器上海有限公司；Waters高效液相色谱仪，二极管阵列检测器：美国waters公司；rancimat 743氧化稳定仪：瑞士万通公司；gc-14b岛津气相色谱仪：日本岛津公司； rj-tdl-50a台式低速大容量离心机，无锡瑞江分析仪器有限公司；zk-82bb型电热真空干燥箱，上海实验仪器厂有限公司；uv-2100分光光度计，unico公司；hn超声波发生器，无锡市华能超声电子有限公司；Trace gc ultra气象色谱仪， ISQ质谱检测仪，AL 3000自动进样器，美国TRACE公司。
1.2方法

1.2.1过氧化值、酸价、AOM值的测定

油样的过氧化值按5538-2005测定，酸价按GB/T 5530-2005测定，AOM值参考TB/T 21121-2007用R743氧化稳定仪测定。

1.2.2脂肪酸组成测定

参考文献CP7489柱，100m*0.25mm*0.20um，甲酯化后进样1ul，升温程序80℃保持3min， 15℃/min升温至215℃保持20min检测器、进样口温度220℃

1.2.3茶多酚测定
参考GB/T 21733-2008测定油中茶多酚的含量。

1.2.4生育酚含量测定

采用HPLC法测定。称取1，08油样，精确至0，0018置于10ml棕色容量瓶中，用正己烷溶解，超声后定容，离心，取20ul进样。sehperisorb silica柱，流动相为正己烷：异丙醇=98.5:1.5,1ml/min，柱温25℃，检测波长295nm。配制混合生育酚标准品的正己垸溶液，浓度为1mg/ml外标法测定生育酚含量，标样和三只样品分别进样，通过标样确定各生育酚的保留时间，同时根据标样总浓度和总峰面积关系可对样品中四种构型的生育酚含量和总生育酚含量进行计算。

1.2.5甾醇和角鲨烯测定

角鲨烯和留醇用气质联用仪同时分析。色谱条件：DB-5柱，柱长30m，内径0.25mm称取200~300mg样品，添加胆甾垸醇作为内标物（配制1mg/ml正己垸溶液，添加0.5ml即可），皂化处理后用正己垸提取、吹干，再用bstfa+tmcs（99:1） 试剂硅烷化处理。进样0.2ul，分流比120:1，升温程序200℃保持1min,25℃/min升温至250℃，再5℃/min升温至280℃，保持15min，检测器、进样口温度290℃.
质谱条件：传输线温度250℃，离子源温度250℃，离子化模式为EI，分子离子碎片扫描范围力m/z50-550。

2结果与讨论

2.1过氧化值、酸价、AOM值和脂肪酸组成

三只样品的酸价、过氧化值和OM值的测定结果如表1所示。三只茶叶籽油过氧化值、酸价、AOM值不同，与它们的精炼程度和存放期长短有关，本文选取几只精炼程度不同的茶叶籽油， 期望在较大范围内对其脂肪伴随物成分进行的分析考察。

三只样品的主要脂肪酸组成测定结果如表2 所示。茶叶籽油的主要脂肪酸组成有多种报道，有时有较大差异，原因可能是不同产地的茶叶籽的品种不同，但也可能是茶叶耔原料中混人了油茶籽。本文选取几种精炼程度，生产时间不同的茶叶籽油，其过氧化值、酸价、AOM值均有较大差异，但主要脂肪酸组成基本一致。

2.2茶叶籽油中的茶多酚含量

三只样品的茶多酚含量测定结果如表3所示。由表3可知，茶叶籽毛油中茶多酚含量最高， 明显高于精炼后的2号和3号，甚至是2号的将近6倍，超过400mg/kg。而茶多酚是一种多酚羟基化合物，亲水性佳，在油脂体系中较难稳定地存在，直接外加一般会造成油脂的浑浊。据此可以推测，茶叶籽油中所含的茶多酚类物质极可能为茶多酚的酯型化合物，即茶多酚酯，茶多酚酯在油脂体系中较稳定。总的来说，茶叶籽油中含有相当量的茶多酚类物质，它的存在形式有待于进一步研究。
2.3茶叶籽油中的生育酚含量

三只样品的生育酚含量如表3所示。由表可知，在茶叶籽油所含的生育酚中，α-生育酚占绝大部分，同时还含有少量的γ-生育酚和δ-生育酚，但三只样品都不含有β-生育酚。2号生育酚含量明显较低，可能是精炼程度较大引起。
2.4茶叶籽油中的角鲨烯含量

三只样品的角鲨烯含量如表3所示。通过比较角鲨烯的含量可以看出，茶叶籽油中角鲨烯的含量波动范围在120-280mg/kg，具体的差异原因还有待进一步研究。

2.5茶叶籽油中甾醇及其它成分的分析

三只样品的总离子流图出峰时间基本一致， 峰形也较为相似，故仅列2号样的总离子流图， 如图1所示。图2为羊毛甾醇峰对应的质谱图及分子结构式。图中明显出现了羊毛甾醇的m/z393 [m-ch3-tmsoh]峰，另有m/z 483（17）为[m-ch3] ，同时也出现了羊毛甾醇的d环开裂离子峰m/z 227（15〕、241〈25)、255（12〉。甾醇特征峰 m/z在图中不是非常明显，但也可看出。另一甾醇特征峰m/z 69（100）则十分明显。综合谱图库的比对结果可确认为羊毛甾醇。同样的，对麦角甾二烯醇的质谱图进行分析及比对，也可确定该物质为△7，22-麦角甾二烯醇。

经计算，三只样品的留醇及其它成分的含量如图3所示。在gc-ms分析中发现，三只茶叶籽油样品的分析结果较为一致，各甾醇及三萜类化合物种类及保留时间吻合度较好。gc-ms分析表明，茶叶籽油中含量最多的甾醇是羊毛甾醇，其次为△7,22 -麦角甾二烯醇，全名为24-甲基胆甾垸-7，22-二烯-3-醇。羊毛甾醇为二甲基甾醇，这种甾醇一般不存在于天然植物油脂中。而麦角甾醇则一般存在于灵芝、树舌等菌类中，并非一般狭义上的植物^醇。它们具有比一般植物留醇更加特别和强烈的生物活性，麦角甾醇更是维生素d合成的前体。在茶叶籽油中发现这两种阁醇，具有重要的意义。

形成对比的是，植物油中常见的^醇仅有谷甾醇在茶叶耔油中被检测到，其它常见植物甾醇（菜油甾醇、菜耔甾醇和豆甾醇）则未被发现。

三只样品中麦角二烯醇、羊毛甾醇和谷甾醇等甾醇的总量可达到2000mg/kg左右，仅植物甾醇（麦角二烯醇和谷阐醇）含量也能达到近。这些甾醇的存在将是茶叶籽油作为健康食用油开发的主要依据。

3结论

本文通过测定三只不同茶叶籽油样品中的几种脂肪伴随物成分的含量，发现茶叶籽油中茶多酚的含量为300-400mg/kg；总生育酚含量300~ 500mg/kg，且以“α-生育酚为主；植物甾醇总量可达1000~2000mg/kg；角鲨烯含量200mg/kg左右。
尤其，茶叶籽油所含的留醇种类与一般的植物油有非常大的区别，这对茶叶籽及茶叶籽油的开发具有指导意义。