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茶树新梢cDNA文库的构建和ESTs测序成功率初步分析

2021-02-25 10:56:54热度:179°C

报道了国内第一个树cDNA文库的构建及其EST测序成功率分析。以Trizol一步法从龙井43春茶新梢中提取总RNA,分离纯化富含Poly(A)的mRNA,LD-PCR反转录合成双链cDNA,以入TripEX2为载体,构建了龙井43新梢cDNA文库。以XL1-Blue为受体菌测定原始文库的滴度为6.8×l0^5 pfu/ml,总克隆数为3.5×l0^5个,重组率为98.05%,扩增后文库总滴度为7.2×l0^9pfu/ml。对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定,表明插入片段大多分布在0.5.2.0kb之间,绝大部分在1.0.1.5kb左右。文库质量鉴定结果表明。构建的茶树新梢cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。对4320个克隆的序列测定表明,获得有用序列2963个,测序成功率为68.5%,剔除短序列后。首批共获得1687个茶树ESTs。

完成机构:[1]中国农业科学院茶叶研究所,浙江杭州3lO008 [2]中国农业科学院研究生院,北京lO008l [3]浙江大学分析测试中心生物大分子研究室,浙江杭州3l0029

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