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油茶DNA提取及RAPD分析最佳反应体系的建立
2021-02-22 11:17:10热度:130°C
[目的]为建立油
茶RAPD分析的最佳反应体系。[方法]分别用改良SDS法和CTAB法从12个油茶品种的新鲜幼叶中提取基因组DNA。通过测定OD260和OD280来比较两种方法提取DNA的纯度。建立油茶的RAPD反应程序，通过优化反应条件获得油茶RAPD分析的最佳反应体系。[结果]CTAB法提取的油茶基因组DNA纯度高于SDS法。油茶RAPD分析的最佳反应体系为：1．0UTaqDNA聚合酶、1．5mmol／LMgCl2、200p．mol／LdNTP、10pmol／L随机引物、20ngDNA模板、2μl10×PCR buffer，加重蒸水至20出。油茶的RAPD反应程序为：95℃预变性3min；94℃变性1min，40℃退火1min，72℃延伸2min，40循环；72℃延伸7min。[结论]该研究所用DNA纯度较高，反应条件控制严格，试验中扩增稳定性较好，是适合油茶RAPD分析的最佳反应体系。
完成机构：南昌理工学院生环系,江西南昌330013
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