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茶树简化EcoTILLING技术的建立
2021-02-21 12:15:54热度:190°C
EcoTILLING （Ecotype Targeting Induced Local Lesions IN Genomes）可快速检测自然群体中的SNP（Single Nucleotide Polymorphism）等DNA变异。第一次建立了简化的
茶树EcoTILLING技术体系：首先筛选扩增目的基因的特异PCR引物；然后通过CELI酶切PCR产物优化实验，确定酶切时间20min、10×buffer组成为250mmol／L Tris-HCI（pH7．4）、150mmol／LKCI、15mmol／LMgSO4、4lag／mLBSA和0．04％Triton x-100，反应温度为47．5℃，酶量为1．8μL CJE（Celery Juice Extract）／10μL反应体系时，酶切的谱带信号较强、特异性高；初步确定合适的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测条件为凝胶浓度5％、上样量4～5μL、有效分离长度要达到15cm。利用上述简化的EcoTILLING对6份茶树种质870bp的PPO基因片段实现了分型，经测序验证酶切产生的谱带与6份种质内部或不同种质间的SNP位置吻合。
完成机构：中国农业科学院茶叶研究所茶树资源与改良研究中心／国家茶树改良中心,浙江杭州310008
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