固相窣取-气质联用法测定吡虫啉在茶叶中残留量

吡虫啉是一种新型的硝基亚甲基类的高效内吸性广谱而且残效期长的杀虫剂，具有胃毒和触杀作用，其有效成分为1-（6-氯吡啶-3-吡啶基甲基）-N-硝基亚咪唑垸-2-基胺，分子式为C9H10CIN5O2。其杀虫机制主要是选择性抑制昆虫神经系统烟酸乙酰胆碱酯酶受体，从而阻断昆虫中枢神经系统的正常传导，

造成害虫出现麻痹进而死亡。近年来吡虫啉被广泛用于茶叶生产上，主要用于防治茶小绿叶蝉，目前日本肯定列表中吡虫啉MRL定为100mg/kg，欧盟EC149/2008中的MRL为0.05mg/kg， 韩国等也对茶叶中吡虫啉残留提出检测要求。

目前国内外巳有吡虫啉残留量检测方法的相关报道，包括在蔬菜、水果中的检测方法，且大多数采用HPLC-UV或者LC-MS/MS法进行检测但未见采用SPE-GC/MS法测定吡虫啉在茶叶中残留检测的报道。因此，研究建立吡虫啉在茶叶中的SPE-GC/MS检测方法，对提高吡虫啉残留检测方法的快速、简便和经济性具有一定的借鉴意义。

1材料与方法

1.1仪器与试剂1.1.1仪器

Agilent 7890A-5975C气相色谱-质谱（GC-MS） 联用仪，美国安捷伦公司；CS501旋转蒸发仪，上海瑞立科学仪器有限公司；IKA T10均质机，德国IKA公司；VM06型6位大体积负压SPE 装置，天津Agela公司。

1.1.2试剂

正己垸、丙酮、乙酸乙酯为分析纯，杭州化学试剂有限公司；乙腈为色谱纯，天津市四友医学生物有限公司；6ML TPT相萃取柱，天津Agela公司；吡虫啉标准品（纯度≥95%），德国Dr.Ehrenstorfer

1.1.3茶叶样品

国家茶叶质量监督检验中心提供。

1.1.4标准溶液配置

准确称取吡虫啉标准品，用乙腈超声溶解，配成100ug/ml的标准母液，使用时将标准储备液稀释成不同浓度的标准溶液。

1.2样品前处理

1.2.1样品制备

按GB/T 8303-2002制备试样。

1.2.2提取和净化

据文献报道，乙腈对吡虫啉的提取效率较好， 对焖碱类农药的提取效果都比较理想，均大于70%，并且乙腈对基质的选择性较大，因此提取液中的色素以及脂类物质含量较少，这大大方便了之后的净化过程。

茶叶中含有大量的叶绿素、茶红素、茶黄素、胡萝卜素、茶多酚和其他大量不确定的干扰物，虽然采用乙腈提取可以选择性地除去一部分茶叶基质，但是还需做进一步的净化处理以除去剩余的色素和其他小分子杂质。活性炭小柱能很好地吸附色素，氨基柱能有效地吸附有机酸和糖分，将这两种小柱串联在一起净化效果较好。因此，本实验选用乙腈作为提取剂，进行实验。

（1）提取。称取2.00g粉碎好的茶叶于10ml离心管中，加人乙腈6ml，15000r/min均质提取1min,4000r/min离心5min，取上清液于200ml平底烧瓶中。残渣用乙腈重复提取一次，离心，合并二次提取液，40℃浴旋转蒸发至1ml左右，待净化。

〈2）SPE净化

1）活化。将5ML乙腈/丙酮/乙酸乙酯=3：2：1 的混合液以每秒1滴的速度通过TPT固相萃取柱，并保持柱子湿润。

2）洗脱。将浓缩液用洗脱液洗入固相萃取柱，以每秒1滴的速度通过小柱，并收集于100ml圆底烧瓶中；再用20ML混合洗脱液（乙腈/丙酮/ 乙酸乙酯=3:2:1）分4次洗脱固相萃取小柱，合并收集于20ML圆底烧瓶中。

3）定容。40℃下减压浓缩至1ML，吹干，用正己垸定容至5ML，供GC-MS检测。

1.2测定条件

色谱柱：DB-1701石英毛细管柱（30M*0.25MM*0.25UM）载气：氦气HE,纯度≥99.999%。，流速1.2ML/MIN；进样口温度290℃；进样量1ul，非分流进样；色谱柱升温程序：70℃保持1min，然后以20℃/min℃程序升温至280℃ ，再以5℃/min升温至290℃，保持110min，再以10℃/min 升温至300℃，保持5min；电离方式为电子轰击电离源（EI）70eV接口温度280℃；四级杆温度150℃，离子源温度230℃；溶剂延迟7min。

1.3标准曲线

将吡虫啉标准母液用正己烷稀释成0.02-8.0mg/kg,，在上述仪器条件下，将1ul不同浓度标准溶液进人气相色谱仪，测定gc/ms对吡虫啉响应的线性关系。

1.4方法回收率

在农残检测中通常以在空白样品中添加一定浓度的标准溶液，然后检测其添加回收率，来衡量检测方法的可靠性气在本试验中，以茶叶样品中含吡虫啉0.08-1.60mg/kg的添加量在空白样品中添加标准溶液，再按前述的样品处理方法处理，检测样品中吡虫啉的实际浓度，并计算添加回收率。

1.5定性和定量方法

选择吡虫啉质量数较大、相对丰度较大的碎片离子作为定量离子，依此原则再选择1-3个碎片离子作为定性离子，以定量离子和定性离子共流出与否以及丰度比来判断样品是否含有目标化合物，由定量离子积分来定量。

2 结果与讨论

2.1气质联用操作条件的确定

由于茶叶中基质相对比较复杂，通过sim可有效消除基质的干扰。实验证明，该仪器分析方法杂质峰少，分离效果好，基线平稳且保留时间适中。

2.2标准曲线的确定

通过测定吡虫啉绝对进样量为0.02mg/l, 0.2mg/l， 0.4mg/1. ， 0.8mg/L ， 1.6mg/l时的峰面积，以绝对进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制进样量峰面积。

结果表明，进样浓度和峰面积之间有良好的线性关系，相关系数r?=0.9927。回归方程如下：

y=116.76x+21.262

2.3方法的回收率实验

按上述色谱条件及检测步骤，进行添加回收率试验，结果如表2所示。结果表明，在0，08~ 1.60mg/kg添加浓度范围内，吡虫啉在茶叶中的回收率为85.27%-95.88%。，变异系数均小于8%……按上述方法测得检测器最小检出量为4.00*10﹣？？g， 样品的最低检出浓度分别为0.018MG/KG

2.4精密度实验

对吡虫啉添加浓度为0.80mg/kg的茶叶样品分别重复5次用本法检测，实验结果见表3，可以看出该回收率方法的相对标准偏差（RSD）小于5%，该方法的精密度达到要求。

3 结论

吡虫啉是一种中等毒性的杀虫剂，具有广阔的市场空间，因此，建立稳定的检测方法显得尤其重要。对我国安全农产品的检测来说有非常重要的现实意义。

由以上实验结果和论述可以看出，该方法是一种快速、准确、有效的茶叶农残测定方法。在前处理环节，采用了乙腈作为提取溶剂，既能有效提取各种农药，又对茶叶中的复杂基质有选择性，因此有效地降低了基质效应；净化过程中采用的TPT小柱可以吸收大部分色素、糖类物质而不保留目标化合物，从而提高了检测灵敏度。由检测结果可以看出，回收率和标准标准偏差基本符合检测要求。

在定性定量方法，传统的ECD、FPD是通过化合物的保留时间定性，只能算作半定性；MSD通过保留时间，标准谱库检索，碎片离子丰度比进行定性，从而有效地降低了假阳性。在定量方面， MSD中的选择离子监测（SIM）方式可以在一定程度上提高化合物的检测限。因此，该检测方法可用于茶叶的无公害和绿色食品标准检测。此外，所以该方法也可以用于出口茶叶的农残检测中。