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蓝萼香茶菜随机扩增多态DNA(RAPD)反应体系优化

2021-02-25 10:45:22热度:140°C

试验以香菜属植物的蓝萼香茶菜[Isodon ja ponica (Burm.f.)Hara var.glaucocalyx (Maxim.)]为材料,采用改进的CTAB法提取基因组DNA,首次建立适合于蓝萼香茶菜的RAPD(Random amplified polymorphic NDA,随机扩增的多态性)分析的PCR反应体系。通过对RAPD条件优化分析,确定蓝萼香茶菜RAPD的最佳方案为:25μl反应体系中包括三磷酸脱氧核苷酸(dNTPs)0.1mmol/L,引物0.4μmol/L,模板DNA90ng,Taq酶(Sangon)3u,2.5μ110×buffer缓冲液(含20mmol/L Mg^2+),其余部分用无菌超纯水补平;PCR扩增循环为93C预变性4min,93C变性45s,36C复性75s,72C延伸2min,40个循环,最后72C延伸10min。

完成机构:齐齐哈尔大学生命科学与工程学院,黑龙江齐齐哈尔161006

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