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核因子E2p45相关因子2基因在茶多酚调节结肠癌细胞尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A及其同工酶表达中的作用

目的 探讨核因子E2p45相关因子2（Nrf2）基因在茶多酚中的主要化学物质epigallocatechin gallate（EGCG）诱导结肠癌细胞尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGT）1A及其同工酶UGT1A8、UGTIA10表达中的调节作用。方法EGCG分别作用Caco-2及HT-29结肠癌细胞12h，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测基因表达水平的变化，免疫细胞化学及激光共聚焦显微镜观察细胞内Nrf2蛋白定位的改变。此外，利用RNA干扰技术抑制细胞内Nrf2基因的表达，观察阻断前后EGCG对基因表达水平影响的改变。结果（1）Caco-2及HT-29结肠癌细胞系、结肠癌及癌旁组织中UGTlA、1A8、1A10基因表达水平存在差异。（2）EGCG作用Caco-2及HT-29细胞后Nrf2、UGTlA、1A8、1A10表达升高1．8～9．2倍（均P〈0．05），免疫细胞化学及激光共聚焦显微镜检测到Nrf2蛋白向细胞核内聚集。（3）酶切分析和测序证实成功构建了RNA干扰真核表达载体pSilence-Nrf2-A、B、C、D及随机序列对照pSilence-CON。（4）pSilence-Nrf2-B质粒转染可显著抑制Nrf2基因的表达，在caco-2及HT-29细胞中抑制率分别为81．46％±1．68％及84．72％±2．08％（实验重复3次）；稳定筛选建立的Nrf2低表达的细胞系Caco-2-siNrf2、HT-29-siNrf2，不仅基础UGT1A酶的表达水平降低，而且EGCG作用后酶诱导表达的作用消失。结论Nrf2基因参与了EGCG诱导UGT1A及其同工酶表达的过程并在其中起关键作用，为进一步论证EGCG在结肠癌化学预防中的作用及其可能的机制提供了新的论据。

完成机构：[1]山东大学齐鲁医院消化内科,济南250012 [2]山东大学齐鲁医院肿瘤中心,济南250012 [3]山东大学齐鲁医院干部保健科,济南250012 [4]山东中医药大学附属医院 [5]山东省立医院消化内科

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