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油茶ISSR反应体系建立及优化
2021-02-22 15:46:16热度:127°C
以改进的CTAB高盐法提取油
茶嫩叶总DNA，进行简单重复序列间扩增（ISSR）分析，分别测试了退火温度、模板DNA浓度、Mg^2＋浓度．dNTPs浓度，TaqDNA聚合酶用量和是否加入去离子甲酰胺对反应结果的影响．油茶ISSR分析的最适反应体系为t在20μL PCR反应体积中．含20ng模板DNA，2．5mmol·L^-1MgCl2,0．2mmol·L^-1dNTPs·1UTaqDNA聚合酶,0．5pmol·μL^-1引物．1%去离子甲基酰胺，扩增程序为，94℃预变性2min；94℃变性30π，52℃退火30s，72℃延伸90s．反应38个循环;最后在72℃延伸7min．
完成机构：江西省植物生物技术重点实验室,江西南昌330032
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