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儿茶酚胺氧位甲基转移酶的克隆表达及纯化
2021-02-22 15:28:12热度:165°C
目的将儿
茶酚胺氧位甲基转移酶基因（COMT）克隆到原核表达载体进行可溶性表达，制备纯化COMT蛋白，为深入研究COMT的功能提供材料。方法运用分子生物学方法构建融合表达质粒Pet22b^＋ -COMT。将Pet22b^＋ -COMT转入E．coli BL21（DE3）表达菌株，利用IPTG诱导表达，并用亲和色谱纯化COMT。结果经测序分析成功构建了融合表达质粒Pet22b^＋ -COMT。COMT基因在E．coli BL21（DE3）中表达相对分子质量约为28000的蛋白质，纯化后，COMT蛋白的纯度大于90％。结论COMT基因在原核中得到良好的表达，得到了纯度较高的蛋白质，为酶学活性研究奠定了基础。
完成机构：中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所,云南昆明650118
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