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粗壮女贞RAPD-PCR实验体系优化的研究
2021-02-22 11:59:20热度:177°C
以粗壮女贞嫩芽为材料,对粗壮女贞RAPD分析中一些重要影响因素,包括模板DNA浓度、dNTPs浓度、Mg^2＋浓度、Taq酶用量、退火温度、延伸时间以及循环次数等因子进行了比较系统的摸索和优化.建立了适合粗壮女贞RAP-PCRD分析的优化反应体系：即25μl 反应体系中Mg2＋浓度为2.5mM,dNTPs浓度为200μM,Taq酶用量为2.0U,引物浓度为10pmol,模板浓度为80ng.PCR扩增程序为：94℃预变性4min,然后按94℃变性30s,37℃退火45s,72℃延伸120s,进行40个循环,最后于72℃延伸10min.以该优化的RAPD条件进行重复实验,其实验结果重现性良好.
完成机构：[1]贵州省茶叶科学研究所,贵州湄潭564100 [2]海南大学苦丁茶研究所,海南海口570228
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